Sisukord:

Kuidas sisestada geen plasmiidi?
Kuidas sisestada geen plasmiidi?

Video: Kuidas sisestada geen plasmiidi?

Video: Kuidas sisestada geen plasmiidi?
Video: Мишка крючком за час! Мастер-класс для начинающих. Мишка из плюшевой пряжи. Подробное описание 2024, November
Anonim

Põhietapid on järgmised:

  1. Lõika lahti plasmiid ja "kleepige" sisse geen . See protsess põhineb restriktsiooniensüümidel (mis lõikab DNA-d) ja DNA ligaasil (mis ühendab DNA-d).
  2. Sisesta a plasmiid sisse bakterid.
  3. Kasvage palju üles plasmiid -kandvad baktereid ja kasutavad neid "vabrikutena" valgu valmistamiseks.

Samuti, kuidas saab geeni sisestada plasmiidi GCSE?

see on sisestatud plasmiidi kasutades ligaasi ensüüme. a plasmiid läheb sisse bakterirakk. transgeenne bakter paljuneb, mille tulemuseks on sisse miljoneid identseid baktereid, mis toodavad iniminsuliini.

Lisaks, kuidas geeni subkloonida? Põhisammud Subkloonimine Vabastate ja puhastate oma inserti lähtevektorist, ligeerite selle inserdi ettevalmistatud sihtvektorisse, transformeerite selle ligeerimisreaktsiooni pädevateks bakterirakkudeks. Seejärel sõelute teisendatud lahtrid sisestuse jaoks.

Kui seda arvesse võtta, siis millised on geeni kloonimise neli etappi?

Klassikaliste restriktsiooniensüümide seedimise ja ligeerimise kloonimise protokollides hõlmab mis tahes DNA fragmendi kloonimine põhiliselt nelja etappi:

  • huvipakkuva DNA (või sihtmärk-DNA) eraldamine,
  • ligeerimine,
  • transfektsioon (või transformatsioon) ja.
  • sõelumis-/valikuprotseduur.

Kuidas plasmiidi amplifitseerida?

Eksperimentaalne protseduur

  1. Käivitage PCR ja puhastage PCR-produkt. Käivitage PCR, et amplifitseerida inserti DNA.
  2. Seedige oma DNA:
  3. Isoleerige oma insert ja vektor geelipuhastusega:
  4. Ühendage oma insert oma vektoriga:
  5. Muutumine:
  6. Eraldage valmis plasmiid:
  7. Kontrollige oma plasmiidi järjestuse järgi:

Soovitan: