Mis on ddNTP-de kasutamise eesmärk?
Mis on ddNTP-de kasutamise eesmärk?

Video: Mis on ddNTP-de kasutamise eesmärk?

Video: Mis on ddNTP-de kasutamise eesmärk?
Video: 7.1 Sanger Sequencing using Dideoxyribonucleic Acid Nucleotides (ddNTPs) 2024, November
Anonim

DdNTP viitab Dideoksünukleotiidid trifosfaadid, mida kasutatakse Sangeri dideoksümeetodis erineva pikkusega DNA ahelate tootmiseks DNA sekveneerimiseks. Selle tulemuseks on DNA polümerisatsiooni (või DNA pikenemise) protsess, kuna see protsess vajab jätkamiseks 3'-OH rühma.

Miks kasutatakse järjestamisel ddNTP-sid?

Dideoksünukleotiidid on DNA polümeraasi ahelat pikendavad inhibiitorid, kasutatud Sangeri meetodil DNA jaoks järjestamine . Dideoksüribonukleotiididel ei ole 3' hüdroksüülrühma, seega ei saa toimuda edasist ahela pikenemist, kui see dideoksünukleotiid on ahelas. See võib viia DNA katkemiseni järjestus.

Samamoodi, kas ddNTP-d kinnituvad dNTP-dele? Üks või mitu dNTP-d on radioaktiivselt märgistatud, et aidata replikatsiooniprodukte visualiseerida. Lõpuks saab iga toru ühe neljast spetsiaalsest nukleotiidist, mida nimetatakse dideoksünukleotiidid ( ddNTP-d ). Kuid pärast sisselülitamist ei saa DNA polümeraas ahelat veelgi pikendada, kuna see vajab 3'-OH-d kinnitada järgmisele nukleotiidile.

Samamoodi võib küsida, kuidas ddNTP-d peatavad sekveneerimisreaktsiooni?

Kui see esineb väikestes kogustes reaktsioonide järjestamine , dideoksüribonukleosiidtrifosfaadid ( ddNTP-d ) lõpetada sekveneerimisreaktsioon kasvavate DNA ahelate erinevates kohtades. ddNTP-d peatavad sekveneerimisreaktsiooni sest need: põhjustavad DNA polümeraasi kukkumise matriitsi ahelast. c.

Millist tehnikat, mis hõlmab dideoksünukleotiide, saab kasutada?

Sangeri järjestus on a meetod DNA järjestuse määramine, mis põhineb ahela lõpetamise selektiivsel lisamisel dideoksünukleotiidid DNA polümeraasi poolt in vitro DNA replikatsiooni ajal. Frederick Sangeri ja kolleegide poolt 1977. aastal välja töötatud see oli kõige laiemalt levinud kasutatud järjestamine meetod umbes 40 aastat.

Soovitan: