Mis juhtub, kui lisate liiga palju restriktsiooniensüümi?
Mis juhtub, kui lisate liiga palju restriktsiooniensüümi?

Video: Mis juhtub, kui lisate liiga palju restriktsiooniensüümi?

Video: Mis juhtub, kui lisate liiga palju restriktsiooniensüümi?
Video: Откровения. Массажист (16 серия) 2024, November
Anonim

Võib esineda mittetäielik seedimine kui liiga palju või ka vähe ensüüm kasutatakse. The saasteainete olemasolu a DNA proov saab pärssida ensüümid , mille tulemuseks on ka mittetäielik seedimine. Mõned restriktsiooniensüümid täielikuks aktiivsuseks on vaja kofaktoreid.

Pealegi, miks lisatakse restriktsiooniensüümid viimasena?

The restriktsiooniensüüm on tavaliselt viimane komponent lisatud reaktsioonile tagamaks, et see ei puutu kokku äärmuslike tingimustega. Kokkupandud reaktsioon tuleks pärast segada ensüüm lisamine. Segage kõik lahused, mis sisaldavad restriktsiooniensüümid õrnalt, et vältida ensüüm inaktiveerimine.

Lisaks, kuidas saab restriktsiooniensüümide seedimist parandada? Kasutage mitte rohkem kui soovitatud ensüüm kogus (nt 10 ühikut ensüüm mikrogrammi DNA kohta). Vähendage kogust ensüüm vajadusel reaktsioonis. Vältige pikaajalist inkubatsiooni seedimist reaktsioon. Kasutage soovitatud reaktsioonipuhvrit.

Tea ka, miks restriktsiooniensüüm ei lõika?

Lõhutava DNA ettevalmistamine peaks ei tohi sisaldada saasteaineid, nagu fenool, kloroform, alkohol, EDTA, pesuained ega liigsed soolad, mis kõik võivad häirida restriktsiooniensüüm tegevust. Kui on olemas inhibiitor (sageli sool, EDTA või fenool), teeb seda kontroll-DNA ei lõigatud pärast segamist.

Miks võib ensüümi hulk põhjustada tähtede aktiivsust?

Staaritegevus on piirangu spetsiifilisuse leevendamine või muutmine ensüüm vahendatud DNA lõhustamine, mis saab tekkida reaktsioonitingimustes, mis erinevad oluliselt nende jaoks optimaalsetest tingimustest ensüüm . Tähetegevus võib tekkida Mg olemasolu tõttu2+, nagu on näha näiteks HindIII-s.

Soovitan: