Kuidas Gibsoni kloonimine toimib?
Kuidas Gibsoni kloonimine toimib?

Video: Kuidas Gibsoni kloonimine toimib?

Video: Kuidas Gibsoni kloonimine toimib?
Video: Cloudics: Kuidas toimub tankimine? 2024, November
Anonim

The Gibsoni kloonimine Master Mix koosneb kolmest erinevast ensüümist ühes puhvris. Igal ensüümil on reaktsiooni jaoks spetsiifiline ja ainulaadne funktsioon: T5 eksonukleaas – loob DNA 5' otsast tagasi närides üheahelalise DNA 3' üleulatuvad osad. Täiendavad DNA fragmendid võivad seejärel üksteisega liituda.

Arvestades seda, kuidas Gibson töötab?

The Gibson Assembly® meetod on kloonimisprotseduur, mis võimaldab kloonida kahte või enamat fragmenti, ilma et oleks vaja restriktsiooniensüümiga seedimist või ühilduvaid restriktsioonisaite. Selle asemel lisatakse fragmentidesse kasutaja määratud kattuvad otsad, et võimaldada külgnevate fragmentide sujuvat ühendamist.

Samamoodi, mis on Gibson Assembly Master Mixis? The Gibsoni kloonimise põhimiks koosneb kolmest erinevast ensüümist ühes puhvris. Igal ensüümil on reaktsiooni jaoks spetsiifiline ja ainulaadne funktsioon: T5 eksonukleaas – loob DNA 5' otsast tagasi närides üheahelalise DNA 3' üleulatuvad osad. Täiendavad DNA fragmendid võivad seejärel üksteisega liituda.

Kuidas Golden Gate'i kokkupanek sel viisil töötab?

Kuldne värav kloonimine või Golden Gate'i kokkupanek on molekulaarse kloonimise meetod, mis võimaldab teadlasel samaaegselt ja suunatult koondada mitu DNA fragmenti üheks tükiks, kasutades IIs tüüpi restriktsiooniensüüme ja T4 DNA ligaasi. See kokkupanek on teostatud in vitro.

Kuidas Gateway kloonimine töötab?

The GATEWAY Kloonimine Tehnoloogia põhineb kohaspetsiifilisel rekombinatsioonisüsteemil, mida faag l kasutab oma DNA integreerimiseks E-sse. Sisestatud faagi DNA-d ümbritsevad attL- ja attR-saidid rekombineeruvad ekstsisiooni ajal saidispetsiifiliselt, et reformida faagi l attP saiti ja attB sait E-s.

Soovitan: