Sisukord:

Miks on vaja PCR tooteid enne sekveneerimist puhastada?
Miks on vaja PCR tooteid enne sekveneerimist puhastada?

Video: Miks on vaja PCR tooteid enne sekveneerimist puhastada?

Video: Miks on vaja PCR tooteid enne sekveneerimist puhastada?
Video: MEKLĒTĀJS II Piepildījumā 2024, Detsember
Anonim

Soovitud kontrollimine toode on hädavajalik , mis hõlmab mittespetsiifiliste puudumise kinnitamist tooted ja praimerite dimeerid. Puhas Samuti on reaktsioonisegu üles vajalik et eemaldada inkorporeerimata praimerid ja dNTP-d, mis võivad segada järgnevaid reaktsioone ja viia loetamatu järjestuse tekkeni.

Pealegi, miks on vaja PCR tooteid puhastada?

Sa pead puhastada PCR tooteid vabaneda kasutamata praimeritest, nukleotiididest ja ensüümidest, et optimeerida ligeerimise edukust, mis säilitab ja järjestab toode kohta PCR . To puhastada a PCR tooted , kasutatakse suuruseralduskromatograafiat.

Võib ka küsida, kas enne restriktsiooniendonukleaasi seedimist tuleks PCR-produkte puhastada? Enamus piirang ensüümid on aktiivsed PCR puhvrid. Kloonimisrakenduste jaoks puhastamine kohta PCR tooted enne seedimist on vajalik et eemaldada aktiivne termofiilne DNA polümeraas, mis esineb PCR segu. DNA polümeraasid võivad muuta lõhustatud DNA otsi ja vähendada ligeerimise saagist.

Inimesed küsivad ka, kuidas valmistate ette PCR-tooteid sekveneerimiseks?

PCR-toodete otsene järjestamine

  1. Veenduge, et võimendasite õiget fragmenti.
  2. Peate eemaldama kõik järelejäänud PCR-praimerid ja inkorporeerimata nukleotiidid.
  3. Kui PCR-praimerid on ka sekveneerimispraimer(id), veenduge, et need vastavad meie tingimustele.
  4. Ärge kontsentreerige proovi üle!

Kas saate järjestada PCR-produkti?

Otsene Järjestus kohta PCR tooted . Järjestus kasutab ainult üks aastal kasutatud kahe asemel krunt PCR . Kui teete ärge eemaldage mõlemat praimerit, sa saad saada kaks järjestused üksteise peale asetatud, mis pole loetavad. On OK kasutada a PCR praimer jaoks järjestamine seni, kuni see vastab meie tingimustele.

Soovitan: