Sisukord:

Kuidas kloone valite?
Kuidas kloone valite?

Video: Kuidas kloone valite?

Video: Kuidas kloone valite?
Video: Kuidas valida parimad päikeseprillid? 2024, November
Anonim

Millal valides a kloon , veenduge, et juured oleksid tugevad, valged ja innukalt kasvusubstraadist välja ulatuvad. Kui juured on pruunid ja kokkutõmbunud või muul moel passiivsed, pange see tagasi ja otsige parem.

Pealegi, kuidas kloonida ühte rakku?

  1. Loendage rakud, et panna ~16 000 rakku 96 süvendiga plaadi esimesse süvendisse (A1), mis sisaldab 200 µL söödet.
  2. Eemaldage A1 sisaldavatest rakkudest 100 µL ja segage B1-ga, pipeteerides 3x üles-alla, et hästi seguneda, enne kui eemaldate 100 µL ja segate C1-ga jne.

Samuti, kuidas valida imetajate rakukolooniat? Asetage plaat mikroskoobi alla, et valida eristamata terve kolooniad . Vali kolooniad kasutades P-20 pipetti, mis on seatud 10 ul. Hoolikalt valima a koloonia lõhkumata koloonia vallaliseks rakud ja viige see trüpsiiniga 96 süvendiga plaadile. Pipeteerige paar korda üles ja alla, et hajutada koloonia.

Vastavalt sellele, kuidas te kasutate kloonisilindrit?

Kasutades steriilsed keskmised tangid, korja üles a kloonimise silinder . Vajutage õrnalt selle lamedat põhja silinder sileda silikoonmäärde sisse ja eemalda äkilise vertikaalse liigutusega. Kui seda tehakse õigesti, jaotub see määrdeaine põhjal ühtlaselt silinder . Määrake silinder üle koloonia.

Kuidas valida stabiilsete rakuliinide jaoks kolooniaid?

Stabiilsete rakuliinide genereerimise protokoll nõuab mitmeid samme, nagu on näidatud allpool:

  1. Looge tapmiskõver, et määrata optimaalse valiku antibiootikumi kontsentratsioon.
  2. Transfekteerige rakud soovitud plasmiidi konstrukti(de)ga
  3. Valige ja laiendage stabiilseid polüklonaalseid kolooniaid.
  4. Tuvastage üksikud kloonid piiratud lahjendamise ja laiendamise teel.

Soovitan: