Miks restriktsiooniensüüm ei lõika?
Miks restriktsiooniensüüm ei lõika?

Video: Miks restriktsiooniensüüm ei lõika?

Video: Miks restriktsiooniensüüm ei lõika?
Video: Çeçen idmançıların xaincəsinə idmançımızın üzərinə hücum etdilər - VİDEO 2024, November
Anonim

Põhjuseid, miks teie restriktsiooniensüüm ei lõika DNA, nagu selles videos vaadatud. Lõhutava DNA ettevalmistamine peaks ei tohi sisaldada saasteaineid, nagu fenool, kloroform, alkohol, EDTA, pesuained ega liigsed soolad, mis kõik võivad häirida restriktsiooniensüüm tegevust.

Miks ei lõika restriktsiooniensüümid sellega seoses bakteri DNA-d?

Bakterid on restriktsiooniensüümid , nimetatud ka restriktsiooni endonukleaasid , mis lõigatud kaheahelaline DNA teatud punktides fragmentideks. Huvitaval kombel restriktsiooniensüümid ära lõhki oma DNA . Bakterid omasid ära hoida DNA alates tükeldamisest restriktsiooniensüüm metüülimise kaudu piirang saidid.

Samuti võib küsida, kust lõikavad restriktsiooniensüümid? Piirav ensüüm Tüübid Üldiselt tüüp I ensüümid lõigatud DNA tuvastamisjärjestusest kaugemal asuvates kohtades; II tüüp lõigatud DNA äratundmisjärjestuse sees või selle lähedal; III tüüp lõigatud DNA äratundmisjärjestused; ja IV tüüp lõikavad metüülitud DNA-d.

Samamoodi küsitakse, mis juhtub, kui lisate liiga palju restriktsiooniensüümi?

Võib esineda mittetäielik seedimine kui liiga palju või ka vähe ensüüm kasutatakse. The saasteainete olemasolu a DNA proov saab pärssida ensüümid , mille tulemuseks on ka mittetäielik seedimine. Mõned restriktsiooniensüümid täielikuks aktiivsuseks on vaja kofaktoreid.

Miks minu piirangute kokkuvõte ei tööta?

Mittetäielik või mitte seedimist DNA metüülimisega blokeeritud ensüümi aktiivsuse tõttu. Kui teie ensüüm on aktiivne ja seedib kontrolli DNA ja a reaktsioon seadistatakse optimaalsetes tingimustes, kuid näete ikkagi probleeme koos seedimist , see võib olla sellepärast a ensüümi inhibeerib metüülimine a matriitsi DNA.

Soovitan: